Ekspresijska analiza dveh mutiranih človeških ornitinskih transkarbamilaz v celicah cos-7 | časopis za človeško genetiko

Ekspresijska analiza dveh mutiranih človeških ornitinskih transkarbamilaz v celicah cos-7 | časopis za človeško genetiko

Anonim

Izvleček

Ornitin transkarbamilaza (OTC) se nahaja v mitohondrijskem matriksu jeter in tankega črevesa in katalizira drugi korak cikla sečnine. Pomanjkanje OTC (OTCD) je prirojena napaka metabolizma z X, ki povzroča hiperammonemijo. Leta 1992 smo poročali o mutacijah A152V in G195R pri bolnikih z OTCD. Te mutirane OTC cDNA so bile pripravljene z lokacijsko usmerjeno mutagenezo z uporabo verižne reakcije polimeraze (PCR). CDNA divjega tipa in mutirana sta bila prehodno eksprimirana v celicah COS-7. KDNA divjega tipa je dala OTC aktivnost 1180 ± 47 nmol / min na mg proteina. Aktivnosti OTC mutantov A152V in G195R so znašale 3, 7% oziroma 2, 5% aktivnosti divjega tipa. Imunoblotska analiza je pokazala, da so bile količine proteinov OTC v mutantih A152V in G195R 29% oziroma 12% divjega tipa. V eksperimentih z označevanjem impulzov in impulznimi lovi se je oblika predhodnika OTC sintetizirala in obdelala do zrele oblike. Mutant OTC A152V je bil obdelan do zrele oblike tako hitro kot predhodnik divjega tipa. Vendar se je predelana, zrela oblika mutantnega OTC hitro razgradila, predvidoma v mitohondrijskem matriksu. Ti rezultati kažejo, da je OTCD z mutacijo A152V posledica hitre razgradnje predelane, zrele oblike in manjše specifične aktivnosti preostalega proteina.